แนะ นำ
ส่วนสําคัญของนิโคตินาไมด์อะดีนีนไดนิวคลีโอไทด์ (NAD+) และสารเมตาบอไลต์ในความชราและความเสื่อมของระบบประสาทได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวาง เพื่อกระตุ้นความก้าวหน้าไปสู่การวิจัยทางชีวเคมีและการแทรกแซงที่มุ่งเป้าไปที่ผู้สูงอายุและโรคทางระบบประสาท จึงมีความสําคัญอย่างยิ่งที่จะหาปริมาณ NAD+ และระดับเมตาบอไลต์อย่างแม่นยําในเส้นทางการกอบกู้ NAD+ ที่นี่ใช้วิธี LC-MS/MS ที่มีประสิทธิภาพและแม่นยําเพื่อหาปริมาณ NAD+ และระดับเมตาบอไลต์ในเส้นประสาทตะโพกของหนูปกติและที่ได้รับบาดเจ็บ
ข้อจํากัดของวิธีการที่มีอยู่ในการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์
วิธีการดั้งเดิมในการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์ เช่น HPLC-UV, NMR, อิเล็กโทรโฟรีซิสโซนเส้นเลือดฝอย หรือการทดสอบเอนไซม์แบบคัลเลอริเมตริก เผชิญกับความท้าทายต่างๆ ในด้านความไว การคัดเลือก และการวัดทางอ้อม สําหรับการทดสอบ LC-MS/MS ที่มีอยู่สําหรับเซลล์หรือเนื้อเยื่อ NAD+ และการวัดสารเมตาบอไลต์ ยังมีปัญหามากมายที่ต้องเอาชนะ เช่น เวลาทํางานที่ยาวนาน พฤติกรรมการเก็บรักษาโครมาโตกราฟีที่ไม่ดี และรูปร่างสูงสุดที่ไม่น่าพอใจ ยิ่งไปกว่านั้น วิธีการเหล่านี้สามารถครอบคลุมสารเพียงหนึ่งถึงสามชนิดในเส้นทางการกอบกู้ NAD+ เท่านั้น
การปรับเปลี่ยนวิธี LC-MS/MS
บนพื้นฐานของการทดสอบ LC-MS / MS ที่มีอยู่จะมีการปรับเปลี่ยนเกี่ยวกับเงื่อนไขโครมาโตกราฟีเมทริกซ์ตัวแทนและเงื่อนไข MS / MS โดยเฉพาะอย่างยิ่งกรดเมทิลีนฟอสโฟนิก 5 μM ถูกนํามาใช้เป็นสารเติมแต่งเฟสเคลื่อนที่ซึ่งส่งเสริมความเข้มของสัญญาณและรูปร่างสูงสุดอย่างชัดเจน ด้วยลักษณะที่ค่อนข้างสะอาดและเรียบง่ายของตัวอย่างที่ไม่เคยมีขนาดเล็ก น้ําบริสุทธิ์พิเศษจึงได้รับการทดสอบเป็นเมทริกซ์ทดแทน แทนที่จะใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟีของเหลวแบบปฏิกิริยาที่ชอบน้ําและคอลัมน์ไฮเปอร์คาร์โบไฮเดรต จะใช้คอลัมน์ Waters Atlantis Premier BEH C18 AX ซึ่งมีเทคโนโลยีพื้นผิวประสิทธิภาพสูง MaxPeak HPS ที่เป็นเอกลักษณ์ (การทู่ผนังด้านในของคอลัมน์ กําจัดพื้นผิวโลหะ) ช่วยให้สามารถทําซ้ําได้สูง สมมาตรสูงสุด และการแยกพื้นฐานของสารวิเคราะห์ทั้งหมด นอกจากนี้ สภาวะ MS ยังได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อลดสัญญาณรบกวน NAD+ ในช่องไซคลิกอะดีโนซีนไดฟอสเฟตไรโบส (cADPR) ในขณะที่ยังคงการตอบสนองของ cADPR และนิโคตินาไมด์โมโนนิวคลีโอไทด์ (NMN) โดยมี 4000V สําหรับแรงดันสเปรย์ไอออน 450°C สําหรับอุณหภูมิฮีตเตอร์เทอร์โบ 50 psi สําหรับแก๊ส 1, 50 psi สําหรับแก๊ส 2, 30 psi สําหรับแก๊สม่าน และ 12 psi สําหรับแก๊สชน
โครมาโตแกรมตัวแทนของตัวอย่างเส้นประสาท (ปกติกับการบาดเจ็บ)
สารวิเคราะห์ทั้งห้าบรรลุการแยกพื้นฐาน โดยที่ cADPR เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่ละเอียดอ่อนในแบบจําลองการเสื่อมของระบบประสาท ในที่นี้ การผ่าตัดเส้นประสาท sciatic ทําให้เกิดการเสื่อมของแอกซอน ซึ่งนําไปสู่ระดับ NAD+ ที่ลดลงและระดับ NMN ที่สูงขึ้นในเส้นประสาทที่ได้รับบาดเจ็บ ส่งผลให้อัตราส่วน NMN/NAD+ เพิ่มขึ้นประมาณ 2 เท่า ในขณะเดียวกันระดับของนิโคตินาไมด์ (NAM) และอะดีโนซีนไดฟอสเฟตไรโบส (ADPR) จะลดลงประมาณ 2 เท่าในขณะที่ระดับ cADPR เพิ่มขึ้นมากกว่า 8 เท่า ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับการวิจัยที่รายงานก่อนหน้านี้ โดยตรวจสอบความถูกต้องของวิธี LS-MS/MS ที่ดัดแปลงนี้ในการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์
บทสรุป
วิธีการ LC-MS/MS ที่ดัดแปลงนี้ช่วยให้สามารถแยก NAD+, NMN, NAM, ADPR และ cADPR พื้นฐานได้อย่างมีประสิทธิภาพภายในรันไทม์สั้น ๆ 5 นาที ซึ่งมีส่วนช่วยในการวินิจฉัยความผิดปกติทางระบบประสาทต่างๆ และการพัฒนายาสําหรับโรคริ้วรอยและระบบประสาท
หนังสืออ้างอิง
การพัฒนาและการตรวจสอบวิธีการ LC-MS/MS สําหรับการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์ที่เกี่ยวข้องในเส้นประสาทตะโพกของหนูและการประยุกต์ใช้กับแบบจําลองสัตว์ที่บาดเจ็บของเส้นประสาท เจ โครมาโตกราฟ A. ดอย:10.1016/j.chroma.2024.464821
บอนแทค นาด
BONTAC ทุ่มเทให้กับการวิจัยและพัฒนา การผลิต และจําหน่ายวัตถุดิบสําหรับโคเอนไซม์และผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติตั้งแต่ปี 2555 โดยมีโรงงานเป็นเจ้าของเอง สิทธิบัตรทั่วโลกกว่า 170 รายการ ตลอดจนทีมงาน R&D ที่แข็งแกร่ง บอนแทคมีประสบการณ์ด้านการวิจัยและพัฒนาอันยาวนานและเทคโนโลยีขั้นสูงในการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ NAD และสารตั้งต้น (เช่น NMN และ NR) มี NAD หลายประเภทให้เลือก ซึ่งรวมถึง NAD ER Grade (การกําจัดเอนดอกซิน), NAD Grade I (IVD/ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร/ผงดิบเครื่องสําอาง), NAD Grade II (API/ตัวกลาง) และ NAD Grade IV (หากมีความต้องการสูงกว่าเกี่ยวกับความสามารถในการละลาย) ซึ่งสามารถให้ในรูปแบบของผงแช่แข็งหรือผงผลึก ความบริสุทธิ์ของ BONTAC NAD สามารถเข้าถึงได้สูงกว่า 98%
ปฏิเสธ
บทความนี้อ้างอิงจากการอ้างอิงในวารสารวิชาการ ข้อมูลที่เกี่ยวข้องจัดทําขึ้นเพื่อวัตถุประสงค์ในการแบ่งปันและการเรียนรู้เท่านั้น และไม่ได้แสดงถึงวัตถุประสงค์ในการให้คําแนะนําทางการแพทย์ใดๆ หากมีการละเมิดใด ๆ โปรดติดต่อผู้เขียนเพื่อลบ มุมมองที่แสดงในบทความนี้ไม่ได้แสดงถึงจุดยืนของ BONTAC ไม่ว่าในกรณีใด บอนแทคจะไม่รับผิดชอบหรือรับผิดไม่ว่าในทางใดทางหนึ่งสําหรับการเรียกร้อง ความเสียหาย ความสูญเสีย ค่าใช้จ่าย หรือค่าใช้จ่ายใดๆ ที่เกิดขึ้นหรือเกิดขึ้นโดยตรงหรือโดยอ้อมจากการที่คุณพึ่งพาข้อมูลและเนื้อหาบนเว็บไซต์นี้