ข้อดีพิเศษของ ELISA ที่มีความไวสูงด้วย Thio-NAD Cycling ในการกําหนดโปรตีนไข้เลือดออก NS1

1. บทนํา

ไข้เลือดออกเป็นโรคติดเชื้อเฉียบพลันที่เกิดจาก ไวรัสไข้เลือดออกผ่านการกัดของยุงสายพันธุ์ Aedes ที่ติดเชื้อ (Ae. aegypti หรือ Ae. albopictus) มีอาการหลัก เช่น ไข้สูง เวียนศีรษะ ปวดศีรษะ ผื่น และ รุนแรงปวด (ปวดตา กล้ามเนื้อ ข้อต่อ หรือกระดูก) เป็นต้น โรคนี้แพร่หลายอย่างกว้างขวางในสภาพอากาศเขตร้อนและกึ่งเขตร้อน มีผู้ติดเชื้อประมาณ 100 ถึง 400 ล้านคนในแต่ละปี ซึ่งมากกว่า 80% มักจะไม่รุนแรงและไม่มีอาการ อย่างไรก็ตาม ไข้เลือดออกอย่างรุนแรงสามารถเพิ่มความเสี่ยงต่อการเสียชีวิตได้หากไม่ได้รับการรักษาอย่างเหมาะสม ดังนั้นการวินิจฉัยโรคนี้ตั้งแต่เนิ่นๆ จึงมีความสําคัญต่อการรักษาอย่างทันท่วงที

น่าสังเกตว่าโปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้าง 1 (NS1) ซึ่งเป็นไกลโคโปรตีนที่ได้รับการอนุรักษ์ไว้สูงส่วนใหญ่จะหลั่งออกมาในระหว่างการติดเชื้อ ไข้เลือดออก ไวรัสซึ่งถือว่าเป็นปัจจัยการเกิดโรคหลักของ ไข้เลือดออก. ดังนั้นโดยทั่วไปแล้ว NSI จึงถูกใช้เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสําหรับการตรวจหาโรคนี้ตั้งแต่เนิ่นๆ

ในการศึกษานี้ การทดสอบอิมมูโนดูดซับที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์แซนวิช(เอลิซ่า)ร่วมกับ ไทโอนิโคตินาไมด์อะดีนีนไดนิวคลีโอไทด์ (thio-NAD/S-NAD) วิธีการปั่นจักรยาน (ต่อไปนี้เรียกว่า ELISA ที่มีความไวสูงเป็นพิเศษ) ใช้เพื่อตรวจจับ NSI ตามด้วยการเปรียบเทียบกับ NAAT เพื่อยืนยันความแม่นยําในการตรวจจับ

2. ข้อดีและข้อเสียของวิธีการตรวจจับแบบดั้งเดิมสําหรับ ไข้เลือดออก 

ปัจจุบัน tต่อไปนี้เป็นวิธีการตรวจจับหลักสี่วิธี เพื่อ ไข้เลือดออก


การแยกและระบุไวรัสมีความจําเพาะสูง แต่ใช้เวลานาน ใช้เวลาอย่างน้อย 5 วัน การทดสอบแอนติเจนอย่างรวดเร็วเป็นวิธีที่เร็วที่สุดและคุ้มค่าที่สุดในบรรดาวิธีอื่นๆ แต่ความไวและความจําเพาะค่อนข้างต่ํา การทดสอบเซโรโลยีตาม IgM และ IgG ถูกจํากัดด้วยจํานวนวันของการติดเชื้อ พื้นที่ การทดสอบจะต้องล่าช้าจนกว่าระดับของแอนติบอดีจะเพิ่มขึ้นถึงระดับที่ตรวจพบได้

ในคลินิกมักใช้ NAAT เพื่อกําหนด ไข้เลือดออกโดยสิ่งสกปรกที่มีความไวและความจําเพาะสูง อย่างไรก็ตามวิธีนี้มีราคาแพงลําบากและมีแนวโน้มที่จะเกิดการมองโลกในแง่บวกที่ผิดพลาดซึ่งต้องดําเนินการโดยบุคลากรที่ผ่านการฝึกอบรม เพื่อเอาชนะข้อเสียของวิธีการเหล่านี้วิธีการตรวจจับใหม่ ELISA ที่ไวเป็นพิเศษคือ นําไปใช้ในการศึกษานี้

3. เวิร์กโฟลว์ของ ELISA ที่มีความไวสูงด้วยการปั่นจักรยาน thio-NAD

แอนติบอดีคู่หนึ่ง คือใช้สําหรับดักจับโปรตีน NS1 ในแซนวิช ELISA และอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส คือติดฉลากบนแอนติบอดีทุติยภูมิ นอกเหนือจากแอนติบอดีแล้ว อนุพันธ์แอนโดรสเตอโรน, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD และ NADH คือใช้ในการสร้างระบบการหมุนเวียนของเอนไซม์ thio-NAD ในระหว่างปฏิกิริยาการหมุนเวียนของ thio-NAD thio-NADH สะสมอย่างต่อเนื่องในรูปแบบเลขสามเหลี่ยมและสามารถวัดได้โดยตรงที่การดูดกลืนแสง 405 นาโนเมตร.

4. การเปรียบเทียบ ELISA และ NAAT ที่มีความไวสูงในการตรวจหาโปรตีนไข้เลือดออก NS1

ใน NAAT มีตัวอย่าง 60 ตัวอย่างเป็นโรคไข้เลือดออกเป็นบวก และ 25 ตัวอย่างเป็นลบจากไข้เลือดออก ค่าเกณฑ์การปั่นจักรยาน NAAT (CT) ของตัวอย่างที่มีเลือดออกเป็นบวกอยู่ระหว่าง 12.42 ถึง 31.41 ใน ELISA ที่มีความไวสูงมาก 59 ตัวอย่างเป็นบวกต่อผลลัพธ์ NAAT ในขณะที่ 25 ตัวอย่างเป็นลบต่อผลลัพธ์ NAAT โดยสิ้นเชิง

เมื่อเทียบกับ NAAT ความไวและความจําเพาะของ ELISA ที่ไวเป็นพิเศษคือ 98.3% และ 100% ตามลําดับ (ตารางที่ 2) จากตัวอย่างผู้ป่วยไข้เลือดออกที่เป็นบวกของ NAAT 60 ตัวอย่าง มีเพียง 1 ตัวอย่างเท่านั้นที่เป็นลบใน ELISA ที่ไวต่อความรู้สึกพิเศษ ข้อมูล NAAT แสดงให้เห็นว่าตัวอย่างเป็นกรณีการติดเชื้อ DENV ประเภท 4 ที่มีค่า CT 21.59 ผลลัพธ์ของ ELISA ที่มีความไวสูงนั้นเกือบจะสอดคล้องกับผลลัพธ์ของ NAAT โดยมีค่า kappa ที่ 0.972 (95% CI: 0.917-1.0).

5. สรุป

วิธี ELISA ที่ละเอียดอ่อนเป็นพิเศษนั้นใช้งานง่ายและไม่จําเป็นต้องมีผู้เข้ารับการฝึกอบรมมืออาชีพในการใช้งาน สามารถเริ่มการตรวจจับได้ทันทีหลังจากได้รับตัวอย่างขนาดเล็ก เหมาะอย่างยิ่งสําหรับการตรวจหาโรคไข้เลือดออกตั้งแต่เนิ่นๆ ในประเทศที่มีรายได้ต่ํา

หนังสืออ้างอิง

Chen, Po-Kai และคณะ "วิธีการตรวจจับขั้นสูงสําหรับโปรตีนไข้เลือดออก NS1 โดยใช้ ELISA ที่ไวเป็นพิเศษกับ Thio-NAD Cycling" ไวรัส ฉบับที่ 15,9 พ.ศ. 2437 8 ก.ย. 2023, doi:10.3390/v15091894

ข้อดีและคุณสมบัติของผลิตภัณฑ์ บอนแทค ทิโอ-แนด/เอส-นาด

บอนแทค คือ one ของไม่กี่องค์กรใน จีนที่สามารถผลิต Thio-NAD ได้กับ "บอนไซม์"วิธีเอนไซม์ทั้งหมด(เป็นมิตรกับสิ่งแวดล้อม;ไม่มีสารตกค้างของตัวทําละลายที่เป็นอันตราย) และ เทคโนโลยีการทําให้บริสุทธิ์เจ็ดขั้นตอน "Bonpure" ที่ไม่เหมือนใคร BONTAC บูรณาการ R & D การผลิตและการขายด้วย โรงงานที่เป็นเจ้าของเองและการรับรองระดับสากลจํานวนหนึ่งเพื่อให้แน่ใจว่ามีการจัดหาผลิตภัณฑ์ที่มีคุณภาพสูงและมีเสถียรภาพ.

ปฏิเสธ

บอนแทคจะไม่รับผิดชอบต่อการเรียกร้องใด ๆ ที่เกิดขึ้นโดยตรงหรือโดยอ้อมจากการพึ่งพาข้อมูลและเนื้อหาบนเว็บไซต์นี้