การหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์ในเส้นประสาท Sciatic ของหนู

แนะ นำ

ส่วนสําคัญของนิโคตินาไมด์อะดีนีนไดนิวคลีโอไทด์ (NAD+) และสารเมตาบอไลต์ในความชราและความเสื่อมของระบบประสาทได้รับการยอมรับอย่างกว้างขวาง เพื่อกระตุ้นความคืบหน้าในการวิจัยทางชีวเคมีและการแทรกแซงที่มุ่งเป้าไปที่ความชราและโรคทางระบบประสาทมีความสําคัญอย่างยิ่งในการหาปริมาณ NAD+ และระดับเมตาบอไลต์ในวิถีการกอบกู้ NAD+ อย่างแม่นยํา ที่นี่ วิธี LC-MS/MS ที่แข็งแกร่งและแม่นยําถูกนําไปใช้เพื่อหาปริมาณ NAD+ และระดับเมตาบอไลต์ในเส้นประสาท sciatic ของหนูปกติและได้รับบาดเจ็บ

ข้อจํากัดของวิธีการที่มีอยู่ในการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์

วิธีการแบบดั้งเดิมในการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์ เช่น HPLC-UV, NMR, อิเล็กโทรโฟรีซิสโซนเส้นเลือดฝอย หรือการทดสอบเอนไซม์คัลเลอริเมตริก เผชิญกับความท้าทายต่างๆ ในด้านความไว การคัดเลือก และการวัดทางอ้อม สําหรับการทดสอบ LC-MS/MS ที่มีอยู่สําหรับ NAD+ ของเซลล์หรือเนื้อเยื่อและการวัดสารเมตาบอไลต์ ยังมีปัญหามากมายที่ต้องเอาชนะ เช่น เวลาทํางานที่ยาวนาน พฤติกรรมการกักเก็บโครมาโตกราฟีที่ไม่ดี และรูปร่างสูงสุดที่ไม่น่าพอใจ ยิ่งไปกว่านั้น วิธีการเหล่านี้สามารถครอบคลุมสารเพียงหนึ่งถึงสามสารในเส้นทางการกอบกู้ NAD+ เท่านั้น

การปรับเปลี่ยนวิธี LC-MS/MS

บนพื้นฐานของการทดสอบ LC-MS/MS ที่มีอยู่จะมีการปรับเปลี่ยนเกี่ยวกับเงื่อนไขโครมาโตกราฟีเมทริกซ์ตัวแทนและเงื่อนไข MS/MS โดยเฉพาะอย่างยิ่งกรดเมทิลีนฟอสโฟนิก 5 μM ถูกใช้เป็นสารเติมแต่งเฟสเคลื่อนที่ ซึ่งส่งเสริมความเข้มของสัญญาณและรูปร่างสูงสุดอย่างชัดเจน ด้วยลักษณะที่ค่อนข้างสะอาดและเรียบง่ายของตัวอย่างที่ไม่เคยมีและมีขนาดเล็กน้ําบริสุทธิ์พิเศษจึงได้รับการทดสอบเป็นเมทริกซ์ทดแทน แทนที่จะใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีปฏิสัมพันธ์ที่ชอบน้ําและคอลัมน์ไฮเปอร์คาร์โบไฮเดรต จึงใช้คอลัมน์ Waters Atlantis Premier BEH C18 AX ซึ่งมีเทคโนโลยีพื้นผิวประสิทธิภาพสูง MaxPeak HPS ที่เป็นเอกลักษณ์ (ทําให้ผนังด้านในของคอลัมน์ทู่ ขจัดพื้นผิวโลหะ) ช่วยให้สามารถทําซ้ําได้สูง สมมาตรสูงสุด และการแยกพื้นฐานของสารวิเคราะห์ทั้งหมดนอกจากนี้ เงื่อนไข MS ยังได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อลดสัญญาณรบกวน NAD+ ในช่อง cyclic adenosine diphosphate ribose (cADPR) ในขณะที่ยังคงการตอบสนองของ cADPR และ nicotinamide mononucleotide (NMN) ด้วย 4000V สําหรับแรงดันสเปรย์ไอออน 450°C สําหรับอุณหภูมิเทอร์โบฮีตเตอร์ 50 psi สําหรับแก๊ส 1, 50 psi สําหรับแก๊ส 2, 30 psi สําหรับแก๊สม่าน และ 12 psi สําหรับแก๊สชน

โครมาโตแกรมตัวแทนของตัวอย่างเส้นประสาท (ปกติกับบาดเจ็บ)

สารวิเคราะห์ทั้งห้าชนิดสามารถแยกได้พื้นฐาน โดยที่ cADPR เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่ละเอียดอ่อนในแบบจําลองการเสื่อมสภาพของระบบประสาท ในที่นี้ การผ่าตัดเส้นประสาท sciatic ทําให้เกิดความเสื่อมของแอกซอน ซึ่งนําไปสู่ระดับ NAD+ ที่ลดลงและระดับ NMN ที่สูงขึ้นในเส้นประสาทที่บาดเจ็บ ส่งผลให้อัตราส่วน NMN/NAD+ เพิ่มขึ้นประมาณ 2 เท่า ในขณะเดียวกันระดับนิโคตินาไมด์ (NAM) และอะดีโนซีนไดฟอสเฟตไรโบส (ADPR) จะลดลงประมาณ 2 เท่าในขณะที่ระดับ cADPR เพิ่มขึ้นมากกว่า 8 เท่า ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับการวิจัยที่รายงานก่อนหน้านี้ ซึ่งตรวจสอบความถูกต้องของวิธี LS-MS/MS ที่ดัดแปลงนี้ในการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์

บทสรุป

วิธี LC-MS/MS ที่ดัดแปลงนี้ช่วยให้สามารถแยกพื้นฐานของ NAD+, NMN, NAM, ADPR และ cADPR ได้อย่างมีประสิทธิภาพภายในระยะเวลาสั้น ๆ 5 นาที ซึ่งส่งผลต่อการวินิจฉัยความผิดปกติทางระบบประสาทต่างๆ ในระยะเริ่มต้นและการพัฒนายาสําหรับโรคชราและโรคทางระบบประสาท

หนังสืออ้างอิง

Ma Y, Deng L, Du Z. การพัฒนาและการตรวจสอบวิธีการ LC-MS/MS สําหรับการหาปริมาณ NAD+ และสารเมตาบอไลต์ที่เกี่ยวข้องในเส้นประสาท sciatic ของหนูและการประยุกต์ใช้กับแบบจําลองสัตว์ที่บาดเจ็บของเส้นประสาท J โครมาโตเกอร์ A. ดอย:10.1016/j.chroma.2024.464821

บอนแทค แนด

บอนแทค ทุ่มเทให้กับการวิจัยและพัฒนาการผลิตและการขายวัตถุดิบสําหรับโคเอนไซม์และผลิตภัณฑ์จากธรรมชาติตั้งแต่ปี 2012 โดยมีโรงงานที่เป็นเจ้าของเองสิทธิบัตรทั่วโลกกว่า 170 รายการรวมถึงทีมงาน R & D ที่แข็งแกร่ง BONTAC มีประสบการณ์ด้านการวิจัยและพัฒนาที่หลากหลายและเทคโนโลยีขั้นสูงในการสังเคราะห์ทางชีวภาพของ NAD และสารตั้งต้น (เช่น NMN และ NR) NAD มีหลายประเภทให้เลือก ได้แก่ NAD ER Grade (การกําจัดเอนโดซิน), NAD Grade I (IVD/ผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร/ผงดิบเครื่องสําอาง), NAD Grade II (API/ตัวกลาง) และ NAD Grade IV (หากมีข้อกําหนดในการละลายสูงกว่า) ซึ่งสามารถให้ในรูปแบบของผง lyophilized หรือผงผลึก ความบริสุทธิ์ของ BONTAC NAD สามารถเข้าถึงได้สูงกว่า 98%

ปฏิเสธ

บทความนี้อ้างอิงจากวารสารวิชาการ ข้อมูลที่เกี่ยวข้องจัดทําขึ้นเพื่อวัตถุประสงค์ในการแบ่งปันและการเรียนรู้เท่านั้น และไม่ได้แสดงถึงวัตถุประสงค์ในการให้คําปรึกษาทางการแพทย์ใดๆ หากมีการละเมิดใด ๆ โปรดติดต่อผู้เขียนเพื่อลบ มุมมองที่แสดงในบทความนี้ไม่ได้แสดงถึงจุดยืนของ BONTAC ไม่ว่าในกรณีใด บอนแทคจะไม่รับผิดชอบหรือรับผิดในทางใดทางหนึ่งสําหรับการเรียกร้อง ความเสียหาย ความสูญเสีย ค่าใช้จ่าย หรือค่าใช้จ่ายใดๆ ที่เกิดขึ้นหรือเกิดขึ้นโดยตรงหรือโดยอ้อมจากการพึ่งพาข้อมูลและเนื้อหาบนเว็บไซต์นี้